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  1. 厌氧菌的固体培养方法有?

1、厌氧菌的固体培养方法有?

答:常用的厌氧培养方法有很多种,如疱肉培养基、厌氧罐法、厌氧袋法、厌氧手套箱法等。

一、疱肉培养基法

疱肉培养基法是最简单的厌氧培养法之一,无需特殊设备。将疱肉和肉汤装入大试管,在液面加入凡士林封闭,从而造成无氧环境。在使用前最好将装有培养基的试管沸水浴10-20min,以使培养基中溶解的氧释放出来。

二、厌氧罐法

厌氧罐法是目前应用较广泛的一种厌氧培养方法,是用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境,从而进行厌氧菌的培养。厌氧罐法又分为以下两种:

1、抽气换气法

该法适用于一般实验室,其特点是较经济,可迅速建立厌氧环境。标本接种后,将平板放入厌氧罐,拧紧盖子,用真空泵抽出罐中空气,使压力真空表至-79.98KPa,停止抽气,充入高纯氮气使压力真空表指针回0 位。连续反复3次,最后在罐内-79.98KPa 的情况下,充入70%的N2、20% H2、10% CO2 (或20% CO2、80% H2)。

罐中需放入冷催化剂钯粒,可催化罐中残余的O2和H2化合成水。同时罐中应放有美蓝指示管,美蓝在有氧的环境下呈蓝色,无氧时为红色。临用前首先将美蓝煮沸使变成无色,放入罐中先呈浅蓝色,待罐中无氧环境形成,美蓝即可持续无色。

2、气体发生袋法

气体发生袋系由锡箔密封包装,其中含有两种药片,一种为含枸椽酸和重碳酸氢钠的药片,另一种是含有硼氢化钠的药片。前者遇水放出二氧化碳,后者可释放氢。

使用时在袋的右上角剪一小口,灌进10ml 蒸馏水,立即放入含有钯粒、指示剂及平板培养基的厌氧罐中,拧紧盖子。经2-3 分钟后,可感到盖子微热并有少量水蒸气出现。密封后1小时左右罐中的O2的含量可低于1%。

三、厌氧袋法

厌氧袋法即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。该方法不需要特殊设备,操作简单,使用方便,不但实验室中可用,而且外出采样,现场接种等也可用。原理与气体发生袋法完全相同,只是采用塑料袋代替了厌氧罐,气袋为一透明而密闭的塑料袋,内装有气体发生管(有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿)、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。其操作方法为首先将接种的平板培养基放入袋中,尽量挤出袋内空气,然后密封袋口。然后先折断气体发生管,20分钟后再折断美兰指示剂管,如果指示剂不变蓝色,说明袋内达到厌氧状态,即可放入37℃ 进行培养。

四、厌氧手套箱法

厌氧手套箱是一整套系统,是最佳的厌氧菌培养法,通常用于厌氧细菌的大量培养研究。厌氧手套箱是一个密闭的大型箱,一般前部是有机玻璃做的透明面板,板上装有两个手套,可通过手套在箱内进行操作。厌氧手套箱可调节温度,本身是孵育箱或孵育箱即附在其内,还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落。使用时应严格遵守操作规程,保证箱内气体比例合理。

常用的厌氧培养方法有许多,可根据实际情况选用:

  1.厌氧缸法接种好标本的平板或液体培养基试管,可放入厌氧缸内培养,厌氧缸是普通的干燥缸,用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境,从而将厌氧菌培养出来。

  2.厌氧袋(Bio-bag)即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。塑料袋透明而不透气,内装气体发生管(有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿)、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。放入已接种好的平板后,尽量挤出袋内空气,然后密封袋口。先折断气体发生管,后折断美兰指示剂管,命名袋内在半小时内造成无气环境。如不突变表示袋内已达厌氧状态,可以孵育。

  3.厌氧手套箱(Anaerobie glove box)是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳 仪器 之一。它是一个密闭的大型金属箱,箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板,板上装有两个手套,可通过手套在箱内进行操作,故名。箱侧有一交换室,具有内外二门,内门通箱内先关着。欲放物入箱,先打开外门,放入交换室,关上外门进行抽气和换气(H2,CO2,N2)达到厌氧状态,然后手伸入手套把交换室内门打开,将物品移入箱内,关上内门。箱内保持厌氧状态,也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。该箱可调节温度,本身是孵箱或孵箱即附在其内,还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落,这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究,大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。

4.厌氧盒:原理同厌氧袋,有成品销售。

5. 生物 耗氧法:在一密闭的容器内放以 生物 (多是植物),消耗氧气,同时产生二氧化碳,供细菌生长用。我没见过。

6.焦性末食子酸法:在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸,均匀撒上焦性末食子酸,然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液,迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面,用融化的白蜡封边,造成一个封闭空间。焦性末食子酸与碱反应后耗氧。该法用于厌氧不严格的厌氧菌的培养,简单。如有梭状芽孢杆菌。

7.疱肉培养基:本身就是一个不需特殊设备的厌氧培养法。疱肉和肉汤装入大 试管 ,液面封凡士林,造成无氧环境。

常用的厌氧培养方法有很多种,如疱肉培养基、厌氧罐法、厌氧袋法、厌氧手套箱法等。

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